注意：本產品試劑組分和操作步驟發生變化，使用前請仔細閱讀說明書。

保存：本產品對光敏感，應該室溫避光儲存，保質期 2 年。無菌開封后，保存于室溫。

試劑盒組成：

試劑 A 200mL 室溫避光

試劑 C 100mL 室溫避光

紅細胞裂解液 100mL 室溫

細胞洗滌液 200mL 室溫

操作步驟一：

紅細胞沉降（僅供參考） 沉降去除紅細胞：取新鮮抗凝血與血液稀釋液(注射用生理鹽水或 1XPBS)及紅細胞沉降液按照 1:1:1 比例混勻，室溫下靜置 30-40min 后，可見紅細胞沉于試管底部，小心吸取上清層(富含白細胞及血 小板)用于后續細胞分離。

操作步驟二：

樣本分離（僅供參考）

1. 樣本分離：當樣本體積小于 5mL 時,先在離心管中先加入 4mL 試 劑 A，后將 2mL 試劑 C 小心疊加于試劑 A 之上，形成梯度界面(樣本 體積大于等于 5mL，試劑 A 與試劑 C 比例 2:1，試劑總量等于沉降后 樣本含量),將懸液小心平鋪于分離液液面上方。由于密度差異，可見 明顯的分層界面(注意二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則 會影響分離效果)。

2. 室溫條件下水平轉子 600-1000g ，25-30min(血液體積越大所需離心力越大,離心時間越長,優良分離條件需摸索，離心最大轉速不超過 1000g)。

3. 離心后，離心管中可見兩個環狀乳白色層，上層為單個核細胞層,下層即所需中性粒細胞層(受 個體差異及分離條件影響，粒細胞白膜層可能會出現顏色較淺的情況)。

4. 用吸管吸取下層中性粒細胞白膜層至新的離心管中，加入 10mL 細胞清洗液洗滌細胞，250g，離 心 10min。

5. 棄上清,加入 5mL 細胞清洗液重懸細胞,250g，離心 5min。

6. 棄上清，重懸細胞備用。

注意事項：

A.開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免 微生物污染。

B.分離液使用時應始終保持室溫（18℃~25℃），如室內溫度較低，可將分離液預熱。4℃或者是 溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層不清晰。

C.血液樣本最好為新鮮抗凝血（采血 2h 以內），為保持中性粒細胞的活性，應避免冷凍和冷藏。

D.稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含 Ca、Mg 離子的緩沖液及培養液，其成分會導致血細胞凝集， 大大降低細胞得率及純度。

E.部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。

F.血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調節離心轉數和離心時間，摸索 優良的分離條件。

G.如果要進一步對分離的細胞進行培養，注意全程保持無菌操作，避免微生物污染。

H.不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提 供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

參考文獻

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標題:The Mechanism of IL-17 Regulating Neutrophils Participating in Host Immunity of RVVC Mice

成員:Shao Mingkun, Hou Mengyao, Li Sainan, Qi Wenjin

論文因子:2.9 發表期刊:Reproductive Sciences pmid:37438557

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標題:Curcumin nanocrystals self-stabilized Pickering emulsion freeze-dried powder: Development, characterization, and suppression of airway inflammation

成員:Lei Li, Shu-Qi Cheng, Yu-Qin Sun, Jian-Bing Yu, Xin-Xin Huang, Yin-Feng Dong, Juan Ji, Xi-Yue Zhang, Gang Hu, Xiu-Lan Sun

論文因子:8.8 發表期刊:Cell Reports pmid:37285269

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標題:MicroLet-7b Regulates Neutrophil Function and Dampens Neutrophilic Inflammation by Suppressing the Canonical TLR4/NF-κB Pathway.

成員:陳斌貞

論文因子:7.561 33868293

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標題:Bio-inspired nanoenzyme for metabolic reprogramming and an-ti-inflammatory treatment of hyperuricemia and gout

成員:張璐

論文因子:6.356

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標題:Near infrared light-triggered metal ion and photodynamic therapy based on AgNPs/porphyrinic MOFs for tumors and pathogens elimination

成員:張璐

論文因子:10.273 32289589

注意：以上文獻 僅供參考

小鼠外周血中性粒細胞分離液試劑盒

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